Chelex-提取DNA准则
来自干燥血斑的疟原虫DNA是通过在5%Chelex的悬浮液中加热样品来提取的。在碱性悬浮液中加热到近C会破坏细胞膜并分解蛋白质，包括热不稳定的酶，而Chelex（一种离子螯合剂）通过灭活核酸酶和螯合可能破坏寄生虫DNA的重金属来限制DNA的破坏。这种方法使得获得适合PCR的寄生虫DNA成为可能。它是一种快速，廉价，有效的DNA提取方法。由于这是PCR过程的第一步，因此保持无菌技术以防止提取的DNA污染非常重要。
Chelex-提取DNA所需材料和设备
1.5毫升微量离心管
1-20μl单通道自动移液器
-μl单通道自动移液器
0μl单通道自动移液器
上述移液器的过滤器移液器吸头
细笔尖记号笔
圆珠笔
纸巾或湿巾
蒸馏水
磷酸盐缓冲液(PBS)
烧杯或洗瓶中的漂白剂(5%)
烧杯或洗瓶中的蒸馏水
烧杯或洗瓶中的乙醇(70%)
Chelex-树脂
剪刀或1/8英寸打孔器（如果使用打孔器，请加上备用滤纸）
定时器
微量离心机
加热块或56C水浴
沸点水浴（96C或以上）
涡流
Chelex-提取DNA程序步骤
要记住的要点：
确保在开始手术前彻底清洁剪刀，在
在切割滤纸之间和程序结束时。不干净的剪刀
可能导致样品交叉污染和质量差的结果。
确保移液器吸头质量高、无菌且不含核酸内切酶。
请勿触摸移液器吸头。
确保定期校准和清洁移液器。
1.打印一份PCR工作表并记录每个待测DBS的样本ID单独的编号行。
2.收集所有必需的用品。注意。如果样品已在+4C或-20C下储存，则必须将它们带到房间样品袋开封前的温度。
3.收集所有必需的用品。通过加入蒸馏水（例如0.2gChelex和10毫升蒸馏水）。注意：Chelex试剂应根据需要每天新鲜制作。
4.将剪刀或打孔器浸入乙醇(70%)中并通过火焰。
5.标记适当数量的1.5ml微量离心管（盖上两个盖子和试管的一侧）带有工作表编号和样品ID。
6.切割2-3块3mmx3mm或打孔3mm圆盘（可容纳约3-5μl干血）从滤纸中取出，放入相应的1.5微量离心管或96孔微量滴定板的孔。
注意：按照步骤5中的详细说明清洁每个样品之间的剪刀。用干净的滤纸冲孔3次。
7.加入1毫升PBS。注意：确保滤纸浸泡在缓冲液中。
8.室温孵育10分钟。
9.14,rpm离心2分钟，用干净的每个样品的移液器吸头。
10.加入1毫升PBS
11.14,rpm离心2分钟，用干净的每个样品的移液器吸头。
12.加入微升无核酸酶水。
13.加入50微升20%Chelex。
14.99C孵育10分钟。
15.14,rpm离心1分钟。
16.将上清液储存在+4C以用于PCR。注意：如果样品储存时间超过一天，请将上清液转移到新鲜的微量离心管并储存在-20C。
